免疫原:人工合成的人BiP近氨基末端的一段多肽(71-91位氨基酸)
宿主:Rabbit
交叉反应性:人、小鼠、大鼠、仓鼠、鸡、爪蟾。
抗体识别位点:BiP N-terminal
BiP分子量:~78kD
应用 | WB | IC |
推荐稀释比例 | 1:1000 | 1:300 |
热休克蛋白(Heat shock protein,Hsp)是一类应激蛋白,包括Hsp20,Hsp60,Hsp70和Hsp90。这类蛋白具有分子伴侣功能,可以短时间(transiently)结合其它蛋白,并协助其它蛋白进行正确折叠。BiP(immunoglobulin heavy chain binding protein in pre-B cells),简称BiP,也称GRP78(78-kD glucose-regulated protein),属于热休克蛋白Hsp70亚家族。该亚家族还包括mtHsp70/GRP75和GRP94。BiP/GRP78是一种钙离子结合分子伴侣,主要定位于内质网。BiP/GRP78是一种高度保守的对于维持细胞正常活性非常重要的蛋白。BiP/GRP78对保证蛋白进行正常的糖基化和折叠,膜蛋白和分泌蛋白的正确定位、以及阻截有质量问题的蛋白是必需的。
诱导内质网应激(ER stress)的刺激,如氧化应激,化学毒性,Ca2+离子载体,内质网Ca2+-ATPase抑制剂、糖基化抑制剂和缺氧等,可以诱导BiP/GRP78表达。葡萄糖饥饿也可以诱导BiP表达。当各种诱导条件导致ER中的蛋白折叠受到干扰并不能完全正常进行时,BiP的表达量就会被上调。随后BiP会结合到错误折叠的蛋白,以避免这些蛋白形成聚集物(aggregates),并促进这些蛋白的正确折叠。BiP对于维持细胞稳态和防止细胞凋亡具有重要作用。BiP水平被认为是低血糖的可靠的分子标志物。在肿瘤细胞中,BiP的产生与防止凋亡、免疫系统攻击、抗肿瘤药物耐药性产生有关。在神经元细胞内出现谷氨酸兴奋性毒性和氧化应激条件下,BiP表现出神经保护作用。在阿尔茨海默病病变大脑,BiP水平下降;研究发现,BiP低表达与Presenilin-1(PS-1)基因突变有关。BiP上调可以被认为是内质网应激的重要指标。
组分 | 规格 |
BiP抗体 | 30μL |
Western一抗稀释液 | 30mL |
保存:-20℃,有效期一年。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存,长期不使用可以考虑-20℃保存,但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测30次。
- 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
- 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1~3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
- Western检测:
- 按照1:1000用百奥莱博提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
- 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时,确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
- 回收稀释的一抗,4℃保存以备下次继续使用。
- 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页:http://www.bjbalb.com/article.aspx?dd=53
- 按照1:1000用百奥莱博提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
- 免疫染色:
可以使用百奥莱博的免疫染色一抗稀释液(货号:YT088)稀释抗体,使用后注意回收稀释好的一抗,具体操作可以参考如下网页:http://www.bjbalb.com/article.aspx?dd=63 - 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
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